如要以實用高效的方式對整個小鼠胚胎成像，快速、清晰的高對比度3D成像解決方案，對于重要細節(jié)展示和解析大有益處。相較于激光共聚焦成像，可在很短的時間內(nèi)一次性采集到完整胚胎的成像結(jié)果。傳統(tǒng)寬場顯微成像速度快，檢測靈敏度高，但是對厚標本的成像，如小鼠胚胎，通常會由于非焦平面信號的影響，呈現(xiàn)模糊的成像結(jié)果，降低圖像對比度^[2,3]。

使用THUNDER Imager 3D Cell Culture對小鼠胚胎成像。使用抗βIII微管蛋白（Tuj1）抗體對胚胎的神經(jīng)系統(tǒng)和腦神經(jīng)進行染色。結(jié)合BABB透明化處理，即可對整個胚胎中的神經(jīng)系統(tǒng)進行三維結(jié)構(gòu)成像。圖1中的圖像使用數(shù)值孔徑（NA）0.75、工作距離700μm的20x多浸液物鏡采集。該圖像由32個視野拼接組成，成像深度為672 μm（337層切），采集了完整的胚胎結(jié)構(gòu)。數(shù)據(jù)采集總時長為18分鐘。

通過LVCC和Instant Computational Clearing（ICC）將寬場成像固有的非焦面模糊信號清除^[2,3]。之后，再使用徠卡自適應(yīng)式反卷積技術(shù)來增強三維特征結(jié)構(gòu)的分辨率^[4]。這種成像模式便于觀察胚胎的神經(jīng)結(jié)構(gòu)以及胚胎的整體布局中更有價值的神經(jīng)元定位。

References：

1.Z. Motahari, T.M. Maynard, A. Popratiloff, S.A. Moody, A.-S. LaMantia, Aberrant early growth of individual trigeminal sensory and motor axons in a series of mouse genetic models of 22q11.2 deletion syndrome, Human Molecular Genetics (2020) vol. 29, iss. 18, pp. 3081-3093, DOI: 10.1093/hmg/ddaa199.

2.J. Schumacher, L. Bertrand, THUNDER Technology Note: THUNDER Imagers: How Do They Really Work? Science Lab (2019) Leica Microsystems.

3.L. Felts, V. Kohli, J.M. Marr, J. Schumacher, O. Schlicker, An Introduction to Computational Clearing: A New Method to Remove Out-of-Focus Blur, Science Lab (2020) Leica Microsystems.

4.V. Kohli, J.M. Marr, O. Schlicker, L. Felts, The Power of Pairing Adaptive Deconvolution with Computational Clearing: Technical Brief, Science Lab (2021) Leica Microsystems.